Grūsnības noteikšana (PAG)

• Nosakāmais rādītājs – grūsnības glikoproteīni - PAG (pregancy-associated glycoproteins)
• Objekts – govju, kazu, aitu piens un govju, kazu, aitu asinis
• Metode - MET-009-01, Grūsnības noteikšana, nosakot PAG (pregancy-associated glycoproteins) govju, kazu un aitu piena, kā arī govju, kazu un aitu asins paraugos ar ELISA metodi, izmantojot IDEXX diagnostisko reaģentu komplektu
• Izmeklēšanas ilgums – 1 diena

Piezīme - Ja paraugi noņemti tikai grūsnības izmeklēšanai un tie atvesti līdz pl.10.00, tad rezultāts būs tās pašas dienas pēcpusdienā. Taču, ja grūsnības izmeklējumi jāveic piena pārraudzības paraugos, tad grūsnības rezultāts būs nākamās dienas pēcpusdienā kopš saņemšanas laboratorijā.

PAG (pregancy-associated glycoproteins) ir glikoproteīni, kurus producē atgremotāju dzīvnieku (govju, aitu, kazu) placentas kotiledonu trofoblastu šūnas un kuri nonāk asinīs un pienā. PAG klātbūtne asinīs vai pienā apstiprina grūsnību.

Diagnostisko reaģentu ražotājs rekomendē testu veikt ne ātrāk kā no 28.dienas (aitām no 35.dienas) pēc pēdējās apsēklošanas vai aplecināšanas, jo tad vēl PAG nebūs tādā koncentrācijā, lai izmeklēšanas rezultāti būtu droši un ticami (iespējams viltus negrūsns rezultāts).

Tāpat testu nevar lietot ātrāk kā 60 dienas pēc pēdējās atnešanās, jo tad pienā/asinīs varētu vēl būt PAG no iepriekšējās grūsnības.

Grūsnības laikā PAG līmenis nedaudz svārstās, taču to līmenis „nenokritīs” zemāk par grūsnības noteikšanas robežu jeb t.s. „cut-off”. To redzam grafikā (no IDEXX Milk Pregnancy Test Validation Report):

Tāpēc nav svarīgi, kādā grūsnības periodā paraugs noņemts, ja vien ievērota prasība „no 28.dienas pēc pēdējās apsēklošanas/aplecināšanas”. Vairāku zinātnieku (Fricke et al, 2015) pētījumi apliecina, ka PAG līmenis palielinās līdz 28.-32.dienai (līdz 5.nedēļai), tad to līmenis līdz 8.nedēļai samazinās (pienam zemāko robežu sasniedzot ap 46.-67.dienu, asinīm ap 53.-60.dienu), bet pēc tam atkal pakāpeniski paaugstinās, dažas nedēļas pirms dzemdībām to koncentrācija pienā/asinīs ir visaugstākā. PAG līmenis asinīs ir nedaudz augstāks salīdzinot ar PAG līmeni to pašu govju pienā (Fricke et al, 2015). Turklāt ir pierādīts, ka PAG līmeni pienā/asinīs nedaudz ietekmē ne tikai grūsnības periods, bet arī, cik grūsnības/dzemdības ir bijušas govij, kāds ir piena izslaukums u.c.

Grūsnības izmeklējumus var veikt:

• govīm, kazām un aitām piena paraugos - gan nekonservētā, gan konservētā piena paraugā. Piena paraugus var ņemt speciāli grūsnības izmeklēšanai, bet var arī izmantot piena pārraudzības analīzēm ņemtos paraugus, tikai pēdējā gadījumā ļoti rūpīgi jāseko pareizai paraugu noņemšanai un marķēšanai.
• Govīm, kazām un aitām asins paraugos – asinis noņem asins stobriņos bez stabilizatora (vakuumstobriņi ar sarkanu korķi) un laboratorijā izmeklējumus veic asins serumā. Govīm izmeklēšanai var izmantot arī asins plazmu, tātad asinis var ņemt arī stobriņos ar stabilizatoru (visbiežāk EDTA jeb vakuumstobriņi ar violetajiem korķiem).

Izmeklējumu rezultāts piena paraugam var būt trejāds:

• „GRŪSNA”
• „negrūsna”
• „Rezultāta precizēšanai jāiesūta atkārtots paraugs pēc 1-2 nedēļām”.

Pēc diagnostisko reaģentu ražotāja validācijas datiem šāds rezultāts tiek prognozēts ~ 3-4% no izmeklētajiem paraugiem.

Piezīmes:

• Ja atkārtotais paraugs būs „negrūsns”, tad tas apstiprinās agrīnās embrionālās nāves gadījumu, kuru visbiežāk novēro grūsnības pirmajās 60 dienās. Dažādu autoru pētījumu dati liecina, ka agrīnie aborti pirmajos 2 mēnešos var būt pat 15% gadījumu, pēc 60.grūsnības dienas abortu risks samazinās uz 2-4% (Santos et al., 2004). Apjomīgi pētījumi ASV apliecina, ka arī pēc 151.grūsnības dienas abortu gadījumu skaits sasniedz 1,3% (Norman et al., 2012).
• Pēc agrīnā aborta PAG izzūd apmēram 7 dienu laikā, tāpēc atkārtotu paraugu nevajadzētu izmeklēt ātrāk kā pēc 1-2 nedēļām.
• Diagnostisko reaģentu ražotājs pieļauj govij, kurai ir vairāk kā 45 dienas pēc pēdējās apsēklošanas/aplecināšanas, šādu rezultātu interpretēt kā „grūsna” (to apliecina IDEXX Milk Pregnancy Test Validation Report).

Izmeklējumu rezultāts asins paraugam var būt:

• „GRŪSNA” vai
• „negrūsna”

ELISA metodes izmantošana ļauj agrīni (jau sākot no 28.dienas pēc pēdējās apsēklošanas/aplecināšanas) atklāt negrūsnos dzīvniekus un tādejādi samazināt servisa periodu (laiku no atslaukšanas līdz apsēklošanai, pēc kuras dzīvnieks ir grūsns), kā arī starp atnešanās intervālu (laiku no vienas laktācijas sākuma līdz nākošās laktācijas sākumam).

PAG loma un funkcijas organismā ir neskaidras. Kā hipotēzi zinātnieki min, ka tie ir kā imunoloģiskā barjera, kas aizsargā augli no mātes imūnsistēmas.

Literatūras avoti:

• Diagnostisko reaģentu ražotāja (IDEXX) instrukcijas „IDEXX Milk Pregnancy” un „IDEXX Bovine Pregnancy”
• https://www.idexx.com/pdf/en_us/livestock-poultry/milk-preg-test-information-lab-focused.pdf
• http://dairyone.com/wp-content/uploads/2014/09/102334-02-EN-L-Milk-Pregnancy-VR_Final.pdf
• http://www.fertalys.ch/storage/MilkPregnancyWebinar_final.pdf
• http://www.nmr.co.uk/pregnancy-testing/
• http://www.wdmc.org/2015/Fricke.pdf
• „Factors associated with pregnancy-associated glycoprotein (PAG) levels in plasma and milk of Holstein cows during early pregnancy and their effect on the accuracy of pregnancy diagnosis”, Journal of Dairy Science, No 4, 2015, 98:2502–2514, http://dx.doi.org/10.3168/jds.2014-8974, © American Dairy Science Association®, 2015
• Disertācija „Pregnancy-associated glycoprotein (PAG) profiles in cows and goats and attempts to measure PAG in milk”, Mazhar Shahin, 2012 November